- Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам – Н. А. Бельская
- АНТИБИОТИКИ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ К АНТИБИОТИКАМ
- Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам
- Проклятая дюжина
- Критически высокий уровень приоритетности
- Acinetobacter baumannii
- Pseudomonas aeruginosa
- Enterobacteriaceae
- Высокий уровень приоритетности
- Enterococcus faecium
- Staphylococcus aureus
- Helicobacter pylori
- Campylobacter spp
- Salmonellae
- Neisseria gonorrhoeae
- Средний уровень приоритетности
- Streptococcus pneumoniae
- Haemophilus influenzae
- Shigella spp
- Итого
- Антибиотики
Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам – Н. А. Бельская
(Согласно Приказу Министерства здравоохранения СССР № 250 от 13.03.75 г. “Об унификации методов определения чувствительности микроорганизмов к химиотерапевтическим препаратам”.)
В клинической практике чувствительными к антибиотикам считают те микроорганизмы, на которые антибиотики оказывают бактериостатическое или бактерицидное действие.
При любом лабораторном исследовании критерием чувствительности микроорганизмов к антибиотикам является минимальная концентрация антибиотика, ингибирующая (задерживающая) рост возбудителя заболевания при стандартных условиях постановки опыта.
Для определения лекарственной чувствительности оптимальным является использование чистой культуры возбудителя.
Выделять культуры микробов из организма для исследования на чувствительность следует до начала лечения антибиотиками, так как под их воздействием рост возбудителя заболевания может быть полностью угнетен.
Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам определяют методом диффузии в агар с применением стандартных дисков или методом серийных разведений в жидких и плотных питательных средах.
Методы определения
Метод дисков. Взвесь изучаемой культуры засевают “газоном” (см. главу 7). В качестве посевного материала можно использовать суточную бульонную культуру или 1 миллиардную микробную взвесь, приготовленную по оптическому стандарту мутности № 10 (см. ниже). Засеянные чашки подсушивают 30-40 мин при комнатной температуре.
Затем на поверхность засеянного агара пинцетом накладывают бумажные диски, пропитанные растворами различных антибиотиков. Каждый диск слегка прижимают браншами пинцета, чтобы он плотно прилегал к поверхности агара. Диски накладывают на равном расстоянии друг от друга и на расстоянии 2 см от края чашки.
Одну чашку можно использовать для изучения чувствительности одного штамма к 4-5 антибиотикам.
Засеянные чашки с нанесенными на них дисками помещают в термостат при 37° С на 18-24 ч. Чашки ставят вверх дном, чтобы избежать попадания конденсационной воды на поверхность посевов.
Учет результатов. Действие антибиотиков оценивают по феномену задержки роста вокруг диска (рис. 25). Диаметр зон задержки роста микробов вокруг дисков определяют с помощью линейки, включая диаметр самого диска. Между степенью чувствительности микроба к антибиотикам и величиной зоны отсутствия роста имеются следующие соотношения (табл. 10).
Рис. 25. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам (метод дисков)
Таблица 10. Определение степени чувствительности микроорганизмов к антибиотикам по величине зоны отсутствия роста
В ответе указывают, какой чувствительностью обладает исследуемый штамм, а не размер зоны задержки роста.
В ряде случаев определяют чувствительность микроорганизмов к антибиотикам в нативном материале (гной, раневое отделяемое и др.).
При этом материал наносят на поверхность питательного агара и равномерно растирают по поверхности стерильным стеклянным шпателем*, а потом накладывают диски.
Метод дисков для определения чувствительности микроорганизмов вследствие простоты и доступности широко применяют в практических лабораториях и расценивают как качественный метод.
* (Для тех видов микроорганизмов, которые не растут на мясопептонном агаре, как, например, стрептококки, пневмококки и другие, применяют агар с кровью или сывороткой.)
Метод серийных разведений в жидкой питательной среде. Этот метод является точным количественным методом, его применяют в научной работе и в особо важных случаях в лабораториях больниц и профилактических учреждений.
Для постановки опыта необходимо иметь чистую культуру испытуемого микроорганизма, основной раствор антибиотика, мясопептонный бульон на переваре Хоттингера, содержащий 1,2-1,4 г/л аминного азота.
Активность антибиотиков выражают в ЕД/мл или мкг/мл. Для приготовления основного раствора антибиотика используют антибиотики, имеющиеся в продаже с указанием количества их во флаконе.
Если на этикетке вместо количества единиц во флаконе дозировка указана в единицах массы, то следует иметь в виду, что 1 г активности для большей части антибиотиков соответствует 1 млн. ЕД. Из этого раствора и должны быть приготовлены требуемые разведения антибиотиков. Указания для приготовления основного раствора антибиотиков на примере пенициллина приведены в табл. 11.
Таблица 11. Получение основного раствора пенициллина
Готовят взвесь культуры микроорганизмов, выросшей на плотной питательной среде. Полученную взвесь сравнивают с оптическим стандартом мутности № 10 (см. ниже), а затем разводят стерильным изотоническим раствором натрия хлорида до 106 микробных тел в 1 мл. Для получения соответствующего разведения микробной взвеси готовят ряд последовательных десятикратных разведений (см. ниже).
Постановка опыта. В 12 стерильных пробирок разливают по 1 мл жидкой питательной среды. В 1-ю пробирку вносят 1 мл основного раствора антибиотика, содержащего, например, 32 ЕД в 1 мл. Содержимое 1-й пробирки перемешивают и 1 мл переносят во 2-ю пробирку, из 2-й – в 3-ю, из 3-й – в 4-ю и так до 10-й, из которой 1 мл удаляют.
Таким образом, 1-я пробирка будет содержать 16 ЕД, 2-я – 8 ЕД, 3-я – 4 ЕД и т. д. Для приготовления каждого разведения используют отдельную пипетку. Содержимое 11-й пробирки служит контролем роста бактерий, а 12-й – контролем стерильности питательной среды. Во все пробирки, кроме 12-й, вносят 0,1 мл испытуемой культуры определенной густоты.
Посев инкубируют в термостате в течение 18-24 ч и регистрируют результаты опыта.
Учет результатов проводят при наличии роста в контроле культуры и отсутствии роста в контроле среды. Затем отмечают последнюю пробирку с полной видимой задержкой роста микробов.
Количество антибиотика в этой пробирке является минимальной ингибирующей концентрацией для испытуемого штамма и определяет степень его чувствительности к данному антибиотику.
В ответе, выдаваемом лабораторией, указывают минимальную ингибирующую концентрацию.
Метод серийных разведений на плотной питательной среде. Готовят двукратные разведения антибиотика, как и при методе серийных разведений в жидкой питательной среде. Затем берут 1 часть каждого разведения антибиотика и 9 частей питательного агара, расплавленного и охлажденного до 42° С (из расчета 1 мл антибиотика + 9 мл МПА), хорошо перемешивают и наливают в чашки Петри.
Густоту (концентрацию) культуры определяют по оптическому стандарту мутности № 10 и разводят стерильным изотоническим раствором до 107 микробных тел в 1 мл.
Бактериальной петлей наносят испытуемые культуры на поверхность питательного агара с антибиотиком. На одну чашку делают посев 20-25 штаммов. Засеянные чашки ставят в термостат при 37° С на 16-20 ч для большинства видов микроорганизмов.
Чашка с питательным агаром без антибиотика, на которую наносят испытуемые культуры, является контрольной.
Учет результатов проводят при наличии роста в контрольной чашке, а минимальную ингибирующую концентрацию антибиотика определяют по последней чашке Петри, где отмечают полную задержку роста бактерий.
Метод дорожки по Флемингу. Метод применяют для определения спектра действия антибиотика. В чашке Петри с МПА стерильным скальпелем вырезают дорожку шириной 1 см и удаляют ее.
Затем в пробирку с растопленным и охлажденным до 42-45° С мясопептонным агаром вносят определенную концентрацию раствора антибиотика. Содержимое пробирки перемешивают и выливают в дорожку так, чтобы жидкость не выходила за ее пределы.
После застывания агара перпендикулярно к дорожке засевают петлей культуры нескольких исследуемых микроорганизмов. Посевы помещают в термостат на 18-24 ч.
Учет результатов. Чувствительные к препарату культуры начинают расти лишь на некотором расстоянии от дорожки, нечувствительные растут до самого края.
⇐ Предыдущая20212223242526272829Следующая ⇒
Дата добавления: 2016-11-22; просмотров: 3670 | Нарушение авторских прав | Изречения для студентов
Источник: https://lektsii.org/11-3177.html
АНТИБИОТИКИ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ К АНТИБИОТИКАМ
Цель занятия. Ознакомить студентов с методами определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.
Оборудование и материалы. Стерильные чашки Петри с МПА, пробирки с чистой культурой стафилококка и кишечной палочки, стерильные градуированные «концевые» пипетки на 2 мл, резиновые груши, набор стандартных дисков с разными антибиотиками, стерильные пинцеты, линейки.
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
Антибиотики. Эти вещества, образуемые бактериями, грибами, растениями, животными тканями, способны убивать микроорганизмы или подавлять их рост. Абсолютное большинство известных антибиотиков получают из актиномицетов. Бактерии синтезируют такие антибиотики, как полимиксины, грамицидины, бацитрацин, гризин.
Из грибов выделены пенициллины, цефалоспорины, фумагиллин, гризеофульвин, из животных тканей — эритрин, экмолин, из высших растений — аллицин и др. Часть антибиотиков получают химическим синтезом (левомицетин), а большинство — биосинтезом. Активность препаратов определяют бактериологическими или физико-химическими методами.
Биологическую активность антибиотиков выражают в условных единицах действия — ЕД. За 1 ЕД принимают специфическую активность, содержащуюся в 1 мкг чистого препарата, но для бензил пенициллина 1 ЕД равна 0,5988 мкг химически чистой натриевой соли препарата.
Активность товарных антибиотиков чаще всего выражают в мкг активного вещества, содержащегося в 1 мг препарата.
Успех лечения инфекционных заболеваний человека и животных зависит от выбора эффективного лекарственного средства с учетом чувствительности к нему возбудителя болезни. Материал для лабораторного исследования следует брать до лечения антимикробными препаратами. Чувствительность микроорганизма к антибиотикам определяют с чистой культурой возбудителя.
Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. К ним относят метод диффузии в агар, метод серийных разведений (на жидкой и плотной питательных средах) и ускоренные методы.
Метод диффузии в агар (метод бумажных дисков). Это наиболее простой в исполнении метод. В качестве питательной среды применяют МПА, агар на переваре Хоттингера с содержанием 120…140мг% аминного азота (рН 7,2…7,4) или агар фирмы «Дифко». Диски с антибиотиками (диаметр 5…6 мм) готовят из специальных сортов фильтровальной бумаги.
Каждый диск содержит определенное количество антибиотика, которое указано на этикетке флакона. Во флакон насыпают силикагель, который впитывает влагу и служит индикатором: при переувлажнении меняет окраску с синей на розовую. При изменении окраски силикагеля во флаконе диски для использования непригодны. Флаконы с дисками хранят при температуре 4…
20 “С.
Расплавленную питательную среду разливают в чашки Петри по 20 мл (толщина слоя 4…5 мм). Перед посевом чашки со средой досушивают в термостате. Для посева используют суточную бульонную культуру или смывы суточной агаровой культуры.
1 мл микробной суспензии в физиологическом растворе (концентрация клеток 109/мл) наносят на агар и покачиванием чашки распределяют по поверхности питательной среды. Избыток жидкости удаляют стерильной пастеровской пипеткой. Засеянные чашки Петри подсушивают при комнатной температуре 30…
40 мин, а затем на поверхность среды стерильным пинцетом накладывают, плотно прижимая, диски с разными антибиотиками на расстоянии 2 см друг от друга и от края чашки. Чашки с дисками выдерживают в термостате при 37 °С 18 ч в положении вверх дном.
Антибиотик из диска диффундирует в агар, вызывая гибель чувствительных бактерий, формируя таким образом вокруг диска зону отсутствия роста (рис. 49). Ближе к диску концентрация антибиотика в агаре выше, по мере удаления от диска концентрация снижается. Следовательно, чем больше диаметр зоны задержки роста вокруг антибиотика, тем более чувствительна к нему исследуемая культура.
Диаметр зоны задержки (отсутствия) роста микроорганизмов измеряют с помощью линейки или миллиметровой бумаги с точностью до 1 мм.
Отсутствие зоны задержки роста микроорганизмов вокруг диска указывает на устойчивость исследуемой культуры к данному антибиотику.
При зоне задержки роста до 14 мм говорят о малой чувствительности к антибиотику, от 15 до 25 мм — о достаточной чувствительности, свыше 25 мм — о высокой чувствительности.
а — к пенициллину; б— к стрептомицину; в — к неомицину; /—зона задержки роста (стерильная зона); 2 — сплошной рост бактерий на поверхности питательной среды; 3 — бумажный диск с антибиотиком
Чтобы получить более точные результаты исследования, необходимо соблюдать стандартные условия при постановке опыта.
Для проверки точности и стандартности определения чувствительности к антибиотикам Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) рекомендует контролировать диски на эталонных штаммах микроорганизмов, которыми служат три культуры из Американской коллекции типовых культур или из Национальной коллекции типовых культур в Англии: S. aureus (АТСС 25923, №СТС 6571), E. coli (АТСС 25922, № СТС 10418), P. aeruginosa (АТСС 27853, № СТС 10662).
Метод серийных разведений. Для проведения опыта готовят основные растворы антибиотиков, используя стандарты антибиотиков. На этикетке ампулы со стандартом указана концентрация антибиотика в ЕД/мл или мкг/мл.
Навески бензил пенициллина калиевой или натриевой соли, ампициллина тригидрата, оксациллина натриевой соли, цефалотина, цефалексина растворяют в 1/15M фосфатном буфере. Основные растворы тетрациклиновых антибиотиков готовят на 0,01 н. растворе соляной кислоты.
Для приготовления основных растворов нео-, моно-, канамицина используют дистиллированную воду. Концентрация основных растворов антибиотиков 1000 мкг/мл.
Метод серийных разведений на жидкой питательной среде: при определении чувствительности к антибиотикам для основной массы микроорганизмов используют МПБ или бульон на переваре Хоттингера, для стрептококков в среду добавляют 1 % глюкозы, для патогенных грибов используют среду Сабуро.
Агаровые или бульонные культуры микроорганизмов предварительно разводят физиологическим раствором до концентрации клеток 5 • 106/мл.
Схема опыта приведена в таблице 2.
Учет результатов: наименьшее количество антибиотика, дающее визуально полную задержку роста (бульон прозрачный), соответствует минимальной подавляющей концентрации препарата (МПК).
Минимальную бактерицидную концентрацию (МБцК) определяют высевом на плотные питательные среды из последних прозрачных пробирок, которые предварительно встряхивают. Наименьшее количество антибиотика в пробирке, содержимое которой после инкубирования в течение 24…
72 ч не дало роста бактерий при высеве на питательную среду, принимают за МБцК.
Метод серийных разведений на плотной питательной среде: для определения чувствительности к антибиотикам большинства микроорганизмов используют МПА или агар на переваре Хоттингера с содержанием аминного азота 120…140мг/мл, рН 7,2…7,4.
Приготовленный основной раствор антибиотиков разводят в плотной питательной среде.
Для этого к расплавленному и охлажденному до 55 ºС агару, разлитому в широкие пробирки по 18 мл, добавляют по 2 мл соответствующего разведения определенного антибиотика, тщательно перемешивают и переливают в стерильную чашку Петри. После застывания агара чашки Петри подсушивают в течение 1 ч.
Контрольные чашки Петри с агаром не содержат антибиотика. Все чашки Петри делят на сектора, каждый из которых засевают исследуемой культурой. Посев делают бактериологической петлей из микробной суспензии с концентрацией клеток 106…107/мл. Чашки помещают в термостат при 37 ºС на 20…24 ч.
Наименьшую концентрацию антибиотика, при которой наблюдают полную задержку роста бактерий на агаре или рост единичных колоний, принимают за МПК препарата.
В том случае, когда рост культуры отсутствует на всех чашках, кроме контрольной, считают, что исследуемые концентрации антибиотиков превышают МПК препарата.
Если на всех чашках отмечают рост культуры, это значит, что микроорганизм устойчив ко всем концентрациям антибиотика.
ЗАДАНИЕ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ
Определить чувствительность культуры стафилококка к антибиотикам методом бумажных дисков.
Контрольные вопросы
1.Что такое антибиотики?
2.Как используют антибиотики в ветеринарии?
3.Какими методами определяют чувствительность микроорганизмов к антибиотикам?
4.Что принимают за минимальную подавляющую концентрацию антибиотика?
Тема 12
Источник: https://megaobuchalka.ru/7/34513.html
Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам
Для определения чувствительности бактерий к антибиотикам (антибиотикограммы)обычно применяют:
• Метод диффузии в агар. На агаризованную питательную среду засевают исследуемый микроб, а затем вносят антибиотики.
Обычно препараты вносят или в специальные лунки в агаре, или на поверхности посева раскладывают диски с антибиотиками («метод дисков»). Учет результатов проводят через сутки по наличию или отсутствию роста микробов вокруг лунок (дисков).
Метод дисков — качественныйи позволяет оценить, чувствителен или устойчив микроб к препарату.
• Методы определенияминимальных ингибирующих и бактерицидных концентраций, т. е. минимального уровня антибиотика, который позволяет in vitro предотвратить видимый рост микробов в питательной среде или полностью ее стерилизует.
Это количественныеметоды, которые позволяют рассчитать дозу препарата, так как концентрация антибиотика в крови должна быть значительно выше минимальной ингибирующей концентрации для возбудителя инфекции.
Введение адекватных доз препарата необходимо для эффективного лечения и профилактики формирования устойчивых микробов.
Есть ускоренные способы, с применением автоматических анализаторов.
Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков.Исследуемую бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар или среду АГВ в чашке Петри.
Среда АГВ: сухой питательный рыбный бульон, агар-агар, натрий фосфат двузамещенный. Среду готовят из сухого порошка в соответствии с инструкцией.
На засеянную поверхность пинцетом помещают на одинаковом расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня. По диаметру зон задержки роста исследуемой культуры бактерий судят о ее чувствительности к антибиотикам.
Для получения достоверных результатов необходимо применять стандартные диски и питательные среды, для контроля которых используются эталонные штаммы соответствующих микроорганизмов.
Метод дисков не дает надежных данных при определении чувствительности микроорганизмов к плохо диффундирующим в агар полипептидным антибиотикам (например, полимиксин, ристомицин).
Если эти антибиотики предполагается использовать для лечения, рекомендуется определять чувствительность микроорганизмов методом серийных разведений.
Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом серийных разведений.Данным методом определяют минимальную концентрацию антибиотика, ингибирующую рост исследуемой культуры бактерий.
Вначале готовят основной раствор, содержащий определенную концентрацию антибиотика (мкг/мл или ЕД/мл) в специальном растворителе или буферном растворе.
Из него готовят все последующие разведения в бульоне (в объеме 1 мл), после чего к каждому разведению добавляют 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии, содержащей 106—107 бактериальных клеток в 1 мл. В последнюю пробирку вносят 1 мл бульона и 0,1 мл суспензии бактерий (контроль культуры).
Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта по помутнению питательной среды, сравнивая с контролем культуры. Последняя пробирка с прозрачной питательной средой указывает на задержку роста исследуемой культуры бактерий под влиянием содержащейся в ней минимальной ингибирующей концентрации (МИК) антибиотика.
Оценку результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проводят по специальной готовой таблице, которая содержит пограничные значения диаметров зон задержки роста для устойчивых, умеренно устойчивых и чувствительных штаммов, а также значения МИК антибиотиков для устойчивых и чувствительных штаммов.
К чувствительным относятся штаммы микроорганизмов, рост которых подавляется при концентрациях препарата, обнаруживаемых в сыворотке крови больного при использовании обычных доз антибиотиков.
К умеренно устойчивым относятся штаммы, для подавления роста которых требуются концентрации, создающиеся в сыворотке крови при введении максимальных доз препарата.
Устойчивыми являются микроорганизмы, рост которых не подавляется препаратом в концентрациях, создаваемых в организме при использовании максимально допустимых доз.
Определение антибиотика в крови, моче и других жидкостях организма человека.В штатив устанавливают два ряда пробирок. В одном из них готовят разведения эталонного антибиотика, в другом — исследуемой жидкости.
Затем в каждую пробирку вносят взвесь тест-бактерий, приготовленную в среде Гисса с глюкозой. При определении в исследуемой жидкости пенициллина, тетрациклинов, эритромицина в качестве тест-бактерий используют стандартный штамм S. aureus, а при определении стрептомицина — Е. coli.
После инкубирования посевов при 37 °С в течение 18—20 ч отмечают результаты опыта по помутнению среды и ее окрашиванию индикатором вследствие расщепления глюкозы тест-бактериями.
Концентрация антибиотика определяется умножением наибольшего разведения исследуемой жидкости, задерживающей рост тест-бактерий, на минимальную концентрацию эталонного антибиотика, задерживающего рост тех же тест-бактерий.
Например, если максимальное разведение исследуемой жидкости, задерживающее рост тест-бактерий, равно 1:1024, а минимальная концентрация эталонного антибиотика, задерживающего рост тех же тест-бактерий, 0,313 мкг/мл, то произведение 1024- 0,313=320 мкг/мл составляет концентрацию антибиотика в 1 мл.
Определение способности S. aureus продуцировать бета-лактамазу.В колбу с 0,5 мл суточной бульонной культуры стандартного штамма стафилококка, чувствительного к пенициллину, вносят 20 мл расплавленного и охлажденного до 45 °С питательного агара, перемешивают и выливают в чашку Петри.
После застывания агара в центр чашки на поверхность среды помещают диск, содержащий пенициллин. По радиусам диска петлей засевают исследуемые культуры. Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта.
О способности исследуемых бактерий продуцировать бета-лактамазу судят по наличию роста стандартного штамма стафилококка вокруг той или другой исследуемой культуры (вокруг диска).
Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:
Источник: https://studopedia.ru/10_129658_metodi-opredeleniya-chuvstvitelnosti-bakteriy-k-antibiotikam.html
Проклятая дюжина
Опубликован список из 12 бактерий, устойчивых к действию большинства антибиотиков
В конце февраля 2017 г. Всемирная организация здравоохранения впервые опубликовала список бактерий с уже выработанной или растущей устойчивостью к действию большинства антибиотиков.
Задача публикации — стимулировать на государственном уровне поиск новых лекарственных препаратов против перечисленных возбудителей, «представляющих наибольшую угрозу для здоровья человека».
Включенные в список бактерии разделены на три группы по приоритетности в плане поиска новых антибиотиков.
Критически высокий уровень приоритетности
- Acinetobacter baumannii
- Pseudomonas aeruginosa
- Enterobacteriaceae
бактерий, устойчивых к антибиотикам, заслуженно возглавляют грамотрицательные микроорганизмы — возбудители большинства нозокомиальных (внутрибольничных) инфекций в отделениях реанимации и интенсивной терапии, гнойной хирургии и онкологии. Вызывают инфекции кожи и мягких тканей, ЖКТ, мочевыводящих путей, раневые, эндокардит, менингит, остеомиелит. У ослабленных пациентов особое значение имеют инфекции кровотока и ИВЛ-ассоциированная пневмония. Для бактерий этой группы практически не осталось антибиотиков резерва.
Acinetobacter baumannii
«Природное» местообитание A. baumannii не установлено, однако этих бактерий обнаруживают в стационарах по всему миру. Вызывает до 1 % всех нозокомиальных инфекций, с уровнем смертности от 8 до 35 %. A.
baumannii резистентна к пенициллинам, цефалоспоринам, аминогликозидам, хинолонам и тетрациклину. Отмечено значительное увеличение резистентности к карбапенемам — более 50 % в отдельных странах.
Выявлены случаи резистентности к «последнему резерву» антибактериальной терапии, полимиксинам, ранее широко не использовавшимся из‑за высокой нефротоксичности.
В терапии карбапенем-резистентной A. baumannii относительно эффективны комбинации антибиотиков: полимиксин Е + рифампицин/карбапенемы/хинолоны/цефепим/ампициллин-сульбактам/пиперациллин-тазобактам.
Pseudomonas aeruginosa
Синегнойная палочка распространена повсеместно, встречается в почве и воде, на/в растениях, животных, людях. Вызывает до 20 % нозокомиальных инфекций. Чувствительность к антибактериальной терапии очень сильно варьирует.
В тяжелых случаях отмечается развитие резистентности к ранее высокоэффективным цефалоспоринам, фторхинолонам, карбапенемам, аминогликозидам, азтреонаму, пиперациллину-тазобактаму.
Сохраняется чувствительность к полимиксину Е, а также комбинациям антибиотиков.
Смертность при развитии инфекций, вызванных мультирезистентной P. aeruginosa, варьирует от 5 до 50 %, в зависимости от состояния пациента и локализации процесса.
Enterobacteriaceae
Из большого семейства энтеробактерий основные проблемы в стационарах доставляют Klebsiella, Escherichia coli, Citrobacter, Salmonella, Enterobacter, Serratia, Proteus. Вызывает опасения растущее повсеместное снижение чувствительности семейства к карбапенемам. Описаны единичные случаи резистентности E. coli ко всем существующим антибиотикам, включая полимиксин Е.
Высокий уровень приоритетности
- Enterococcus faecium
- Staphylococcus aureus
- Helicobacter pylori
- Campylobacter spp.
- Salmonellae
- Neisseria gonorrhoeae
Бактерии второй группы объединены по признаку повсеместного распространения, высокой социально-экономической значимости вызываемых ими заболеваний и быстрого развития резистентности к основным антибиотикам, используемым для их эрадикации, однако в резерве еще остается один или несколько эффективных препаратов.
Enterococcus faecium
E. faecium входит в состав нормальной микрофлоры кишечника, но в то же время является условно-патогенным микроорганизмом. У ослабленных больных может вызывать инфекции мочевыводящих путей, раневую инфекцию, сепсис и эндокардит.
Резистентен к аминогликозидам, пенициллинам и цефалоспоринам. Беспокойство вызывает снижение чувствительности к ванкомицину — до 72 % в отдельных популяциях. Большинство штаммов E.
faecium чувствительны к линезолиду, тигециклину, даптомицину.
Staphylococcus aureus
Золотистый стафилококк, колонизирующий кожу и слизистые оболочки, способен вызывать тяжелые инфекции кожи и мягких тканей, респираторные, раневые инфекции, остеомиелит, сепсис, артрит, эндокардит.
Недавнее появление и распространение ванкомицин- и гликопептид-резистентных штаммов в дополнение метициллин-резистентному S.
aureus значительно сужает выбор антибактериальных препаратов, однако у возбудителя сохраняется чувствительность к аминогликозидам, эритромицину, тетрациклину, ко-тримоксазолу, линезолиду.
Helicobacter pylori
Тревогу ВОЗ вызывает увеличение случаев резистентности всем известной H. pylori к кларитромицину, что сказывается на эффективности традиционных схем эрадикационной терапии, в том числе и в России.
Перед эрадикацией ВОЗ рекомендует проверить чувствительность бактерии к этому антибиотику, при выявлении устойчивости — использовать схемы без него — с метронидазолом, тетрациклином или рифаксимином, а также добавлять висмута трикалия дицитрат.
Campylobacter spp
Бактерии рода Campylobacter удерживают первое место в мире по гастроэнтеритам, которые у большинства населения планеты протекают в легкой форме, но представляют опасность для маленьких детей, беременных, стариков и иммунокомпрометированных больных.
В большинстве случаев достаточно регидратации и восстановления электролитного баланса, антибактериальную терапию назначают при тяжелом течении. Проблемой является резистентность Campylobacter к фторхинолонам, основному средству борьбы с кишечной микрофлорой, и макролидам.
Устойчивость к этим препаратам, впрочем, сильно варьирует от страны к стране — от менее 5 % в Финляндии до более 90 % в Индии. В Европе и России эритромицин всё еще остается препаратом выбора. По данным микробилогических исследований, в России также еще вполне актуальны фторхинолоны.
В запасе для особо тяжелых случаев с осложнениями — гентамицин и карбапенемы.
Salmonellae
Представители рода сальмонелл также вызывают набор кишечных инфекций, от легкого энтерита до брюшного тифа. Большинство этих бактерий уже резистентны к бета-лактамам, аминогликозидам, тетрациклинам, хлорамфениколу и ко-тримоксазолу.
Устойчивость к фторхинолонам растет во всем мире, но пока не привела к полной бесполезности этих препаратов, они остаются антибиотиками выбора, наравне с макролидами и цефалоспоринами третьего поколения.
Антибактериальной терапии требуют только тяжелые случаи кишечных инфекций и, конечно, брюшной тиф и паратифы.
Neisseria gonorrhoeae
Гонорея из неприятной, но относительно легко излечимой болезни эволюционировала в глобальную медицинскую проблему. Гонококк потерял чувствительность к пенициллинам, тетрациклинам, сульфаниламидам и фторхинолонам.
Особое опасение вызывает появление и постепенное распространение штаммов, резистентных к цефалоспоринам (цефтриаксону), долгое время служивших безотказным средством борьбы с этой инфекцией.
При резистентной к стандартным схемам лечения гонорее рекомендовано использовать комбинацию азитромицина с высокими дозами цефтриаксона.
В России гонококк также практически резистентен к фторхинолонам, но пока сохраняет 100 %-ную чувствительность к цефтриаксону.
Средний уровень приоритетности
- Streptococcus pneumoniae
- Haemophilus influenzae
- Shigella spp.
Третью группу также представляют широко распространенные бактерии, чья устойчивость к «обычным» антибиотикам пока не приняла угрожающих масштабов, однако чревата большими проблемами в будущем.
Streptococcus pneumoniae
Пневмококки — одни из основных возбудителей инфекций ЛОР-органов, внебольничной пневмонии, менингита. Резистентны к тетрациклину и ко-тримоксазолу. В мире постепенно снижается чувствительность S.
pneumoniae к бета-лактамам и макролидам, однако, как и в других случаях, доля резистентных штаммов сильно варьирует от страны к стране.
В России большинство штаммов пневмококков, к счастью, всё еще чувствительны к пенициллинам и макролидам, также эффективны хлорамфеникол, рифампицин, левофлоксацин, ванкомицин.
Haemophilus influenzae
Гемофильная инфекция у детей младшего возраста протекает в виде бактериемии, гнойного менингита, пневмонии, целлюлита и эпиглоттита, у взрослых — в основном в виде пневмонии.
Тревогу ВОЗ вызывает развитие полной резистентности гемофильной палочки к ранее эффективному ампициллину, в результате чего от него пришлось повсеместно отказаться.
В России эффективны амоксициллин, цефалоспорины и макролиды, однако рекомендуется проводить бактериологический анализ с оценкой резистентности.
Shigella spp
Возбудители дизентерии практически не чувствительны к ампициллину. Как и прочие энтеробактерии, они также постепенно вырабатывают устойчивость к фторхинолонам, которые тем не менее всё еще остаются препаратами выбора. В качестве альтернативы — цефалоспорины III поколения, ко-тримоксазол.
Итого
Появление устойчивых к антибиотикам бактерий и публикация этого списка в очередной раз привлекают внимание человечества к необходимости создания — в идеале — принципиально новых средств борьбы с микроорганизмами, иначе, по пессимистичным прогнозам, из-за появления бактерий, устойчивых к антибиотикам, через несколько десятилетий одна только послеоперационная летальность может скатиться до уровня начала прошлого века. Разработка таких препаратов — занятие неблагодарное, поэтому фармацевтические компании не стремятся развивать данное направление, и ВОЗ выносит проблему на межгосударственный уровень.
Проблема лекарственной устойчивости среди возбудителей нозокомиальных инфекций — первые пять бактерий списка — актуальна и для российского здравоохранения.
Остальные перечисленные микроорганизмы, по данным российских исследований, на территории РФ в целом сохраняют чувствительность к «своим» антибиотикам.
Тем не менее, учитывая возросшую мобильность населения, можно ожидать завоза и распространения резистентных штаммов.
Сводная таблица: чувствительность возбудителей к антибактериальной терапии
Возбудитель | Чувствительность к антибактериальной терапии | ||
Нет или в большинстве случаев утеряна | Снижается | В основном сохранена | |
Acinetobacter baumannii | Пенициллины, цефалоспорины, аминогликозиды, тетрациклин, хинолоны, азтреонам, пиперациллин-тазобактам | Карбапенемы, полимиксин Е | Комбинации: полимиксин Е + рифампицин/ карбапенемы/ хинолоны/ цефепим/ ампициллин-сульбактам/пиперациллин-тазобактам |
Pseudomonas aeruginosa | Пенициллины, цефалоспорины, аминогликозиды, тетрациклин, хинолоны | Карбапенемы | Полимиксин Е, комбинации а/б.+ В РФ: карбапенемы |
Enterobacteriaceae (госпитальные штаммы Klebsiella, Escherichia coli, Citrobacter, Enterobacter, Serratia, Proteus) | Пенициллины, цефалоспорины, тетрациклин, хинолоны | Карбапенемы, аминогликозиды. + В РФ: цефалоспорины III-IV пок. | Полимиксин Е, комбинации а/б.+ В РФ: карбапенемы |
Enterococcus faecium | Пенициллины, цефалоспорины, аминогликозиды | Ванкомицин | Линезолид, тигециклин, даптомицин |
Staphylococcus aureus | Пенициллины, цефалоспорины | Защищенные бета-лактамы, | Пенициллины, цефалоспорины |
Helicobacter pylori | Кларитромицин, метронидазол | В составе комбинированной терапии с ИПП и висмута трикалия дицитратом: амоксициллин, тетрациклин, рифаксимин | |
Campylobacter spp. | Пенициллины, цефалоспорины, аминогликозиды, тетрациклины. В ряде стран Азии и Африки: фторхинолоны, макролиды | Фторхинолоны, макролиды | Гентамицин, карбапенемы. + В РФ: макролиды, фторхинолоны |
Salmonellae | Пенициллины, цефалоспорины, аминогликозиды, тетрациклины, хлорамфеникол, ко-тримоксазол | Фторхинолоны | Фторхинолоны, макролиды, цефалоспорины III-IV пок., карбапенемы |
Neisseria gonorrhoeae | Пенициллины, тетрациклины, фторхинолоны, сульфаниламиды | Цефалоспорины | Азитромицин + цефтриаксон. + В РФ: цефалоспорины III-IV пок. |
Streptococcus pneumoniae | Тетрациклин, ко-тримоксазол | Пенициллины, цефалоспорины, макролиды | Хлорамфеникол, рифампицин, респираторные фторхинолоны, ванкомицин. + В РФ: пенициллины, цефалоспорины, макролиды |
Haemophilus influenzae | Ампициллин, ко-тримоксазол | Бета-лактамы (в отдельных случаях – защищенные), ко-тримоксазол, хлорамфеникол | Цефалоспорины III-IV пок., карбапенемы, хлорамфеникол, рифампицин |
Shigella spp. | Ампициллин, хлорамфеникол | Фторхинолоны | Цефалоспорины III-IV пок., аминогликозиды, ко-тримоксазол. + В РФ: фторхинолоны |
Источники
- Сайт Всемирной организации здравоохранения.
- «Функциональная гастроэнтерология»
- Durante-Mangoni E., Zarrilli R.
Global spread of drug-resistant Acinetobacter baumannii: molecular epidemiology and management of antimicrobial resistance // Future Microbiol. 2011; 6 (4):407–22.
- Partridge S. R. Resistance mechanisms in Enterobacteriaceae // Pathology. 2015; 47 (3): 276–84.
- Hooper D. C., Jacoby G. A. Mechanisms of drug resistance: quinolone resistance // Ann N Y Acad Sci. 2015;1354: 12-31.
Источник: https://www.katrenstyle.ru/articles/journal/medicine/spotlight/proklyataya_dyuzhina
Антибиотики
Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам и бактериофагам
Культуральное бактериологическое исследование (посев на питательные среды, бак.посев) позволяет получить непосредственно культуру микроорганизма – возбудителя данной инфекции.
Выделив культуру, ее можно во-первых точно идентифицировать (определить вид микроба), а во-вторых определить ее чувствительность к лекарственным препаратам – антибиотикам (антибактериальным препаратам) и бактериофагам.
Этот тест (определение антибиотикочувствительности, «подтитровка антибиотиков» ) имеет важнейшее значение для последующего лечения, т.к. позволяет выбрать препарат, максимально подходящий для лечения конкретного возбудителя.
Необходимость такого анализа связана с тем, что даже бактерии одного вида, но выделенные от разных животных (разные штаммы) могут отличаться по спектру чувствительности.
Сегодня выпускаются десятки наименований антибиотиков (АБ), относящиеся по своему строению к различным группам. Например, для лечения стафилококка могут применяться препараты как минимум девяти фармакологических групп, каждая из которых включает несколько наименований.
Выбрать из них оптимальный для лечения конкретного возбудителя – непростая задача, решить которую невозможно без определения антибиотикочувствительности.
Характерная особенность современных возбудителей – частая встречаемость высокоустойчивых (мультирезистентных) штаммов микроорганизмов. Они проявляют устойчивость к действию различных групп антибиотиков – одной или сразу нескольких.
Например, грамотрицательные бактерии семейства Enterobacteriaceae (к ним относятся такие распространенные возбудители как Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa) образуют ферменты БЛРС – беталактамазы расширенного спектра.
Эти ферменты нейтрализуют действие бета-лактамных антибиотиков (пенициллинов и цефалоспоринов). У штаммов стафилококков также существует механизм резистентности, маркерным признаком которого является устойчивость к метициллину.
МРС – метициллинрезистентные стафилококки – проявляют устойчивость ко всем бета-лактамным антибиотикам. Среди энтерококков растет количество полирезистентных штаммов, устойчивых в том числе и к ванкомицину (препарату выбора).
В ходе бактериологического исследования в компетентных лабораториях у микроорганизмов проводят определение указанных маркеров резистентности, и дают результаты в заключении.
Это дает информацию лечащему врачу, антибиотики каких групп будут эффективны, какие будут бесполезны.
В лабораторной практике нередки случаи, когда возбудитель устойчив почти ко всем протестированным антибиотикам, за исключением 1-2 препаратов.
Определение чувствительности к антибиотикам обычно проводят диско-диффузионным методом, используя стандартизованные питательные среды и стандартизованные диски с антибиотиками.
Используют как минимум два набора антибиотиков – один для грамположительных (Гр+), другой для грамотрицательных (Гр-) микроорганизмов (что соблюдается увы не во всех лабораториях).
Также наборы антибиотиков несколько отличаются в зависимости от источника происхождения – например, для культур из мочи обычно ставят дополнительно несколько препаратов-«уросептиков».
Если от животного выделено несколько культур микроорганизмов, чувствительность к АБ определяется индивидуально к каждой из них. Результаты лаборатория выдает по общепринятой градации: «Ч» — культура чувствительна к антибиотику; «П» — промежуточный уровень чувствительности; «У» — культура устойчива.
Также целесообразно определение чувствительности к бактериофагам – препаратам вирусной природы, имеющим ряд преимуществ по сравнению с антибиотиками, хорошо себя зарекомендовавшим в гуманной медицине. Существуют моновалентные и поливалентные бактериофаги.
В лабораториях обычно определяют чувствительность к трем бактериофагам – одному моновалентному (специфичному для конкретного возбудителя) и двум поливалентным, включающим комплекс фагов против нескольких видов бактерий. Без лабораторного определения чувствительность возбудителя к бактериофагам практически непредсказуема.
Фаг может «работать» очень хорошо, а может быть вообще не активным против данной культуры микроба.
Итак, по результатам лабораторного бактериологического исследования врач получает на руки информацию, необходимую для эффективного лечения конкретной инфекции. Традиционный подход (сначала лечим тем, что есть, потом диагностируем) постепенно уходит из практики.
Препараты широкого спектра, на которые привыкли надеяться лечащие врачи, все чаще дают сбои, в силу распространения высокоустойчивых штаммов.
Кроме того, лечение животного неспецифическим антибиотиком ведет к тому, что нормальная микрофлора организма сильно страдает, а патогенная флора адаптируется к антибиотикам, приобретает устойчивость, и вылечить такое животное в дальнейшем будет крайне сложно.
Очевидно что в экстренных случаях, при критических состояниях у врача нет времени дожидаться результатов анализов. Однако в остальных случаях потраченное на анализ время окупится гораздо быстрее, чем длительное лечение неэффективным препаратом.
Определение чувствительности грибов к противогрибковым препаратам (антимикотикам) также проводится в некоторых диагностических бак.лабораториях и имеет свои особенности, о чем Вы можете прочитать в соответствующем разделе сайта БакПосев-Вет.Ру.
Источник: www.bakposev-vet.ru
Источник: http://bakposev-vet.ru/antibiotiki/
К ним относят метод диффузии в агар и метод серийных разведений (на жидкой и плотной питательных средах).
Для посева используют суточные чистые культуры выделенных микроорганизмов. При отсутствии возможности получения чистой культуры можно использовать дрожжевую взвесь или производственный субстрат, содержащие всю микрофлору в исследуемом материале.
При исследовании материала, содержащего дрожжевые клетки, в остывшие до
45–50°С питательные среды вносят нистатин и тщательно перемешивают.
17.1. МЕТОД ДИФФУЗИИ В АГАР (МЕТОД БУМАЖНЫХ ДИСКОВ)
Наиболее простой в исполнении метод, однако его нельзя считать количественным.
В качестве основы питательной среды целесообразно применять производственное агаризованное (2,5%) сусло с содержанием 120–140 мг% аминного азота. Питательную среду разливают в чашки Петри слоем 4–5 мм. Перед посевом чашки со средой досушивают в термостате или в стерильном боксе.
Диски с антибиотиками (диаметр 5–6 мм) готовят из специальных сортов фильтровальной бумаги. Каждый диск содержит определенное количество антибиотика, которое указано на этикетке флакона.
Во флакон насыпают силикагель, который впитывает влагу и служит индикатором: при переувлажнении силикагель меняет окраску с синей на розовую. При изменении окраски силикагеля во флаконе диски для использования не пригодны.
Флаконы с дисками хранят при температуре 4–20°С.
0,5 см3 исследуемого материала наносят на агар и шпателем Дригальского тщательно распределяют по поверхности питательной среды до полного впитывания.
Затем на поверхность среды стерильным пинцетом накладывают, плотно прижимая, диски с разными антибиотиками на расстоянии 2–2,5 см друг от друга и от края чашки.
Чашки с дисками выдерживают в термостате при 37°С в течение 24–48 ч в положении вверх дном.
Антибиотик из диска диффундирует в агар, вызывая гибель чувствительных бактерий, формируя таким образом вокруг диска зону отсутствия роста. Ближе к диску концентрация антибиотика в агаре выше, по мере удаления от диска концентрация снижается. Следовательно, чем больше диаметр зоны задержки роста вокруг антибиотика, тем более чувствительна к нему исследуемая культура.
Диаметр зоны задержки (отсутствия) роста микроорганизмов измеряют с помощью линейки или миллиметровой бумаги с точностью до 1 мм. Отсутствие зоны задержки роста микроорганизмов вокруг диска указывает на устойчивость исследуемой культуры к данному антибиотику.
При зоне отсутствия роста до 10 мм культура считается устойчивой, от 10 до 15 мм говорят о малой чувствительности к антибиотику, от 15 до 25 мм – о достаточной чувствительности, свыше 25 мм – о высокой чувствительности.
17.2. МЕТОД СЕРИЙНЫХ РАЗВЕДЕНИЙ
Для проведения опыта готовят основные растворы антибиотиков. Готовятся они с таким расчетом, чтобы в первой пробирке концентрация антибиотика составила 100 ЕД/см3.
На этикетке ампулы или флакона указана концентрация антибиотика в ЕД/см3 или мкг/см3.
Навески бензил-пенициллина калиевой или натриевой соли, ампициллина тригидрата, оксациллина натриевой соли, цефалотина, цефалексина растворяют в 1/15 М фосфатном буфере (калия фосфат однозамещенный – 3,63 г, натрия фосфат двузамещенный – 7,13 г, вода дистиллированная – до 1000 см3).
Основные растворы тетрациклиновых антибиотиков готовят на 0,01 Н растворе соляной кислоты. Для приготовления основных растворов нео-, моно–, канамицина используют дистиллированную воду.
Если на этикетке препарата дозировка указана в весовых единицах, следует иметь в виду, что для большей части антибиотиков 1 г активного вещества соответствует 1 000 000 ЕД. Из этого расчета и следует разводить антибиотик.
Если порошок антибиотика, расфасован немерно и на этикетке указано количество единиц активности в 1 мг, необходимо к точной навеске препарата, сделанной на аналитических весах, добавить равный объем растворителя, т. е. получить раствор мг/см3, в 1 см3 которого содержится столько единиц, сколько их было указано на этикетке. Из этого основного раствора делают дальнейшие разведения.
Для определения чувствительности микробов к сульфаниламидам может быть применен любой из указанных методов, причем во внимание принимается только степень разведения навески препарата.
17.2.1. МЕТОД СЕРИЙНЫХ РАЗВЕДЕНИЙ В ЖИДКОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ
На основе стерильного производственного сусла готовится серия 2-кратных серийных разведений исследуемого антибиотика. Первая пробирка содержит 100 ЕД/см3 антибиотика, каждая последующая – в два раза меньше. Засевная доза исследуемой суточной бактериальной культуры составляет 10% от общего объема питательной среды.
Питательную среду разливают по 4,5 см3 в пробирки, расставленные в штативы по 10 в каждом ряду. Готовят основной раствор антибиотика и добавляют 4,5 см3 этого раствора в первую пробирку.
После тщательного перемешивания новой стерильной мерной пипеткой переносят 4,5 см3 из этой пробирки в следующую и т. д. до девятой пробирки, из которой 4,5 см3 выливают.
Десятая пробирка, не содержащая антибиотика, служит контролем роста культуры.
Для постановки этого опыта используют имеющиеся в продаже препараты, на этикетке которых указано количество единиц во флаконе.
Например, если флакон содержит 500 000 ЕД пенициллина, то, добавив в него 10 см3 дистиллированной воды, получают раствор, содержащий в 1 см3 50 000 ЕД, при дальнейшем разведении в 100 раз получают раствор с концентрацией пенициллина 500 ЕД/см3.
Для получения требуемой концентрации антибиотика дальнейшие разведения целесообразнее делать с использованием стерильной питательной среды.
Чистые агаровые или бульонные культуры микроорганизмов предварительно разводят физиологическим раствором до концентрации клеток 5·106 клеток/см3 в соответствии со стандартом мутности.
Агаровую культуру испытуемого микроба смывают изотоническим раствором хлорида натрия. Полученную взвесь по 1,0 см3 вносят во все пробирки ряда, начиная с контрольной.
Результаты регистрируют после инкубации при 37°С в течение 24–48 ч. Последняя пробирка с прозрачным бульоном, при наличии густого роста в контроле, определяет минимальную, подавляющую рост данного микроорганизма концентрацию антибиотика.
Учет результатов: наименьшее количество антибиотика, дающее визуально полную задержку роста (среда прозрачная), соответствует минимальной подавляющей концентрации препарата (МПК или МБсК).
Минимальную бактерицидную концентрацию (МБцК) определяют высевом на плотные питательные среды из последних прозрачных пробирок, которые предварительно встряхивают.
Наименьшее количество антибиотика в пробирке, содержимое которой после инкубирования в течение 24–72 ч не дало роста бактерий при высеве на питательную среду, принимают за МБцК.
17.2.2. МЕТОД СЕРИЙНЫХ РАЗВЕДЕНИЙ НА ПЛОТНОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ
Для определения чувствительности к антибиотикам большинства микроорганизмов используют МПА или 2,5%-ный агар на основе производственного сусла с содержанием аминного азота 120–140 мг/см3. Приготовленный основной раствор антибиотиков разводят в плотной питательной среде.
Для этого к расплавленному и охлажденному до 55°С агару, разлитому в широкие пробирки по 18 см3, добавляют по 2 см3 соответствующего разведения определенного антибиотика, тщательно перемешивают и переливают в стерильную чашку Петри.
После застывания агара чашки Петри подсушивают в течение 1 ч. Контрольные чашки Петри с агаром не содержат антибиотика. Все чашки Петри делят на сектора, каждый из которых засевают исследуемой культурой.
Посев делают бактериологической петлей из микробной суспензии с концентрацией клеток 106–107 клеток/см3. Чашки помещают в термостат при 37°С на 24–48 ч.
Наименьшую концентрацию антибиотика, при которой наблюдают полную задержку роста бактерий на агаре или рост единичных колоний, принимают за МПК препарата.
В том случае, когда рост культуры отсутствует на всех чашках, кроме контрольной, считают, что исследуемые концентрации антибиотиков превышают МПК препарата.
Если на всех чашках отмечают рост культуры, это значит, что микроорганизм устойчив ко всем концентрациям антибиотика.
Общую чувствительность к сульфаниламидам, как и к антибиотикам, можно определить методом канавки. На агаре в чашке Петри по ее диаметру прорезают канавку, в которую вносят определенное разведение изучаемого препарата.
Перпендикулярно к канавке засевают штрихом изучаемые культуры микроорганизмов. После инкубации при 37°С 24–48 ч отмечают наличие участков задержки роста микроорганизмов, если последние чувствительны к данному препарату.
Источник: https://alternativa-sar.ru/tehnologu/pivo-i-napitki/g-s-kachmazov-drozhzhi-brodilnykh-proizvodstv/1643-17-metody-opredeleniya-chuvstvitelnosti-mikroorganizmov-k-antibiotikam