Определение антибиотиков в молоке

Гост р 51600-2010 «молоко и молочные продукты. микробиологические методы определения наличия антибиотиков»

Определение антибиотиков в молоке

ФЕДЕРАЛЬНОЕАГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУРЕГУЛИРОВАНИЮИМЕТРОЛОГИИ
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙФЕДЕРАЦИИГОСТ Р51600- 2010

МОЛОКОИМОЛОЧНЫЕПРОДУКТЫ

Микробиологическиеметодыопределенияналичия антибиотиков

МоскваСтандартинформ2010

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации – ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом молочной промышленности Россельхозакадемии (ГНУ ВНИМИ Россельхозакадемии) и Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Россельхозакадемии (ГНУ ВНИИВСГЭ Россельхозакадемии)

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 26 февраля 2010 г. № 25-ст

4 ВЗАМЕН ГОСТ Р 51600-2000

Информацияобизмененияхкнастоящемустандартупубликуетсявежегодноиздаваемом информационномуказателе«Национальныестандарты», атекстизмененийипоправоквежемесячноиздаваемыхинформационныхуказателях«Национальныестандарты». Вслучаепересмотра (замены) илиотменынастоящегостандартасоответствующееуведомлениебудет опубликовановежемесячноиздаваемоминформационномуказателе«Национальныестандарты». Соответствующаяинформация, уведомлениеитекстыразмещаютсятакжевинформационной системеобщегопользованиянаофициальномсайтеФедеральногоагентствапотехническому регулированиюиметрологиивсетиИнтернет

НАЦИОНАЛЬНЫЙСТАНДАРТРОССИЙСКОЙФЕДЕРАЦИИ

МОЛОКОИМОЛОЧНЫЕПРОДУКТЫМикробиологическиеметодыопределенияналичияантибиотиковMilk and milk products. Microbiological methods for determination of antibiotics indication

Датавведения 20110101

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на сырое, пастеризованное, стерилизованное и предварительно восстановленное сухое коровье молоко (далее – молоко) и устанавливает качественные микробиологические методы определения наличия антибиотиков:

– чашечный метод с Bacillus stearothermophilus,

– метод с Bacillus stearothermophilus и индикатором бромкрезолпурпур,

– метод с Bacillus stearothermophilus и индикатором бриллиантовый черный.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 51446-99 (ИСО 7218-96) Микробиология. Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований

ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ Р 53430-2009 Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического анализа

Источник: http://gostrf.com/norma_data/58/58614/index.htm

О гостах по определению антибиотиков в молоке

Определение антибиотиков в молоке

Недобросовестный подход некоторых фермеров к подкормке скота приводит к загрязнению продуктов питания остатками разных лекарственных средств, включая антибиотики. Последние нередко применяются не только для лечения животных, но и для сохранности кормов, улучшения их качества, ускорения роста особей.

Вследствие того, что лечебные препараты способны продолжительное время оставаться в продуктах животноводства, они попадают в человеческий организм.

Большое скопление антибиотиков провоцирует возникновение аллергических реакций с тяжелыми последствиями в виде отека Квинке, угнетает активность полезных ферментов, изменяет микрофлору ЖКТ, способствует образованию и размножению устойчивого вида микрофлоры. Чем обусловлено повышенное содержание химических веществ в пищевых продуктах?

Наличие лекарств в молоке — повышенная опасность продукции

Препараты синтетического происхождения добавляют в прикорм скоту для стимуляции биохимических реакций в организме особей, повышения продуктивности, ускорения роста, улучшения общего состояния.

Очевидно, что антибиотики оказывают негативное влияние на микробиологические процессы в сфере производства кисломолочных продуктов. В результате на прилавки поступают изделия, изготовленные по технологии, опасной для здоровья.

Изучение динамики ферментации продукции на основе молока, например, кефира или сметаны, позволяет определить отсутствие или замедление сквашивания в образцах и сделать вывод о массе содержащихся остаточных химических веществ. Только представьте: молочный продукт от одной коровы, которую лечили антибиотиками, сделает тонну молока непригодной для дальнейшей переработки!

Для защиты населения от опасной кисломолочной продукции государство утвердило основную документацию, которая регламентирует норму показателей безопасности продовольственного сырья и пищевых изделий. Также тщательно проработаны методы контроля ингибирующих компонентов, позволяющие вовремя выявить и предотвратить фальсификацию продуктов, поступающих в продажу.

Микробиологический метод

ГОСТ Р 51600-2000 устанавливает нормативы на проведение микробиологических анализов с целью выявления наличия и концентрации антибиотиков. Для получения эффективного результата также используются экспресс-тесты, которые основаны на исследовании специфических рецепторов группы тетрациклинов и бета-лактамов.

Чтобы выполнить одно определение, необходимо затратить не больше 5 минут. В зависимости от вида химического вещества чувствительность теста составляет от 2 до 80 мкг/кг.

В соответствии с ГОСТом присутствие в молочном продукте антибиотика определяют по диаметру участка ингибиции. В основе метода — проверка способности синтетических компонентов соединяться в среде со спорами тест-микробов и препятствовать их развитию.

Для анализа отбираются пробы молока, которые хранятся в холодильном оборудовании не больше одних суток при установленном температурном режиме (5±1) °С. Споры получают из питательной среды, в основе которой — дистиллированная вода, глюкоза, дрожжевой экстракт.

Минимальная концентрация, определяемая во время анализа, достигает 0,05 мкг/мл. Единственный недостаток такого метода — это продолжительность статирования экземпляров, трудоемкость проведения лабораторного исследования.

Иммуноферментный способ

ГОСТ 32219-2013 регламентирует порядок определения концентрации стрептомицина и левомицетина в стерилизованном, пастеризованном и сыром коровьем молоке.

В основе метода лежит иммуноферментная реакция, в результате которой химические вещества охватываются специфическим белковым рецептором.

В итоге образуется прочный комплекс, который блокирует способность технического индикатора менять цветность продукта изучаемого процесса.

Присутствие в составе кисломолочных изделий антибиотиков определяется визуально. При этом в лаборатории сравнивается интенсивность цвета участка при наличии синтетических соединений с оттенком контрольной зоны.

Высокоэффективная жидкостная хроматография

ГОСТ 33526-2015 действует с 2016 года и позволяет с высокой точностью определять содержание в продуктах переработки молока антибиотиков. Согласно регламенту диапазон анализа массовой доли химических компонентов для группы тетрациклина и пенициллина составляет до 1,0 млн-1 (мг/кг).

В основе метода — экстракция (извлечение) антибиотика из образцов молока. Пробы проходят стадию очистки экстракта, после чего устанавливается точная масса синтетических веществ с помощью технологии спектрофотометрического детектирования. Все лабораторные процессы происходят на хроматографе с высоким диапазоном измерений.

Инструментальный метод

ГОСТ 32254-2013 разработан для предприятий молочной отрасли и технически регулирует процедуру сертификации и стандартизации продукции с проверкой ее содержимого на наличие антибиотиков.

С помощью данного метода можно проводить тесты с точностью не меньше 95 %. В их основе лежит связывание синтетических веществ с антителами, которые вызывают иммунохроматическую окрашиваемую реакцию. Учитывая интенсивность окраски, лаборант делает заключение о контрольном количестве антибиотика.

Изменения в ГОСТах в 2017-2018 годах

В некоторые правила по техническому регулированию были введены корректировки. Так, слово «пенициллин» было заменено на «пенициллины», дополнен раздел о порядке приема и способах отбора образцов для исследования. Также был расширен список продуктов, подлежащих анализу: плавленые сырные изделия, масло на основе молока, сыры и спреды.

Экспресс-тесты от компании «АТЛ»

Для контроля химического состава кисломолочной продукции целесообразно использовать быстрые тесты, предлагаемые ООО «АТЛ», которые с высокой точностью определят наличие и массу антибиотиков.

Полоски с измерительными линиями просты и удобны в применении, соответствуют требованиям ГОСТов, позволяют проводить анализ вне лабораторных условий.

Результаты исследования долго сохраняются и могут в дальнейшем использоваться для сравнительной оценки.

Источник: https://atl-ltd.ru/publications/opredelenie-antibiotikov-v-moloke-obzor-gostov/

Методы определения наличия антибиотиков в молоке – ООО ЛонгТрейд

Определение антибиотиков в молоке

Иммунологические и микробиологические методы

К иммунологическим методам относятся экспресс тесты на антибиотики в молоке. Их действие основано на анализе интенсивности реакции специфических рецепторов – белков, связанных с частицами золота. Технология удобная, от лаборанта не требуется специальное химическое образование. Результат получают быстро, в среднем на исследование требуется от 5 до 10 минут. Считывающее устройство не обязательно, в некоторых случаях надо применять инкубатор, для создания необходимой температуры пробы в пределах от + 40 до + 50 град С. Анализ можно делать в полевых условиях, термостаты подключаются к источнику питания 12/24В. Каждый тест рассчитан на определение одной или нескольких (до четырех) групп антибиотиков.

В основу ингибиторных микробиологических методов положено влияние антибиотиков на штаммы микроорганизмов. Наличие медпрепаратов в молоке обнаруживается при диффузии их в агар – определением интенсивности торможения развития тестовых культур, которые были внесены в питательную среду.

Молоко помещают в виалы (небольшие, от 0,3 до 20 мл стеклянные или пластиковые лабораторные флаконы) с питательной средой. В ней содержится штамм бактерий Bacillus strearothermophius calidolactis. А также индикатор кислотности. При росте или снижении рН, он изменяет окраску среды, по которой определяют наличие антибиотиков в пробе.

Виалы инкубируют 3 часа при Т = 64 град С. Если в пробе антибиотиков нет, то бактерии быстро развиваются, кислотность меняется, а вместе с ней – и цвет среды. Если же медикаменты в молоке есть, то они угнетают рост бактерий, рН не меняется, цвет среды остается таким же, как в начале анализа.

Преимущество подобных тестов заключается в возможности в течение одного исследования обнаружить полный спектр антибиотиков и других ингибиторов. Недостаток – сравнительно долгое время работы, обязательное применение инкубатора. Такой способ больше подходит для перерабатывающих предприятий, а не для фермеров. Стоимость ингибиторного микробиологического метода ниже, чем экспресс-теста.

Люминесцентные методы

Эти методы основаны на сенсибилизированной люминесценции ионов Tb (III) и Eu (III). Обычно они применяются для определения медпрепаратов хинолонового и тетрациклинового ряда.

Органические лиганды, к которым относятся и антибиотики, характеризуются высокими молярными коэффициентами поглощения. Они интенсивно впитывают энергию возбуждения.

При этом, если энергия лиганда в триплетном состоянии больше, чем тот же параметр иона лантанида на резонансном уровне, то она может ему передаваться. Ион возбуждается и начинает излучать кванты света.

Электрохимические методы

Такие способы применяются для обнаружения медикаментов тетрациклиновой группы. Используется ионометрия и амперометрическое титрование.

Ионные ассоциаты антибиотиков, с гетерополианионами структуры Кеггина, выступают в роли электродно-активного компонента мембран ионселективных электродов. При амперометрической технологии титрантом является 12-молибдофосфорная кислота.

Достоинствами методики являются ее селективность, простота проведения и высокая чувствительность.

Хроматографические методы

Технологии данной группы основаны на определении изменения интенсивности молекулярной постколоночной люминесценции антибиотиков (в основном, тетрациклинового ряда), которая усиливается при образовании комплексов с катионом циркония (IV). Самым эффективным считается метод ВЭЖХ с ультрафиолетовым или флуоресцентным детектированием.

В молочной промышленности применяются, в основном, иммунологические и микробиологические тесты. К первой группе относятся инкубаторные и безинкубаторные способы.

Назначение форсенсора

Тесты на антибиотики в молоке 4sensor (форсенсор) являются одним из наиболее популярных в данной группе по той причине, что с их помощью можно одновременно определить наличие сразу четырех медикаментов: β-лактамного типа (пенициллина и цефалоспорина), тетрациклиновой группы, левомицетина (хлорамфеникола) и стрептомицина.

Набор рассчитан на работу с различными видами сырья – не только с натуральным молоком, но также с пастеризованным или сухим. Последнее в количестве 10 г смешивается в 90 мл подогретой до 40 град С дистиллированной воды. Можно исследовать сыворотку, в том числе, сухую. Свернувшееся молоко проверять нельзя.

Данный комплект включен в качестве тест-набора №7 в ГОСТ 32219-2013 «Молоко и молочные продукты. Иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков» (пункт 3.10, сноска №7). Одна упаковка рассчитана на 96 тестирований.

Устройство форсенсора

Инкубатор-термостат HeatSensor DUOТесты на антибиотики в молоке 4 сенсор состоят из двух компонентов:

Микролунка (пробирка), для пробы молока. В ней имеется определенное количество моноклональных белковых антител (рецепторов), меченых коллоидным золотом.

Тест – полоска хроматографической бумаги. Она представляет собой набор мембран с линиями связывания. Каждая мембрана настроена на определенный вид антибиотиков.

Так как в процессе анализа проба молока должна быть подогрета до 40 град С, то для работы с комплектом нужен инкубатор-термостат. Производитель рекомендует применять только Heatsensor . Остальные, как сказано в инструкции к набору, не подходят. В том же документе говорится, что, если инкубатор отсутствует, можно пользоваться водяной баней.

Считывание данных выполняется двумя способами: визуально или с помощью специального аппарата Readsensor . Второй метод позволяет выполнить диагностику более точно, а также зафиксировать результаты исследований.

Порядок работы форсенсора

Включить инкубатор Heatsensor. Его можно будет использовать после того, как температура поднимется до 40 град С. На это требуется около 10 минут.

Поставить микролунку в термостат.

В пробирку с реагентами пипеткой добавить 0,2 куб. см. молока. Перемешать его до гомогенизированного состояния. Проба должна быть однородной и жидкой, без расслоения на фазы, осадка или сгустков. Для перемешивания надо 5 раз наполнить лунку и слить содержимое с помощью пипетки.

Если пробирок несколько, то для каждой на пипетке должен быть «свой» наконечник. Рекомендуемая температура сырья до помещения в инкубатор – от 4 до 20 град С.

Смешивать надо быстро, так как, после добавления молока в микролунку, между находящимися в ней химическими веществами и пробой начинается реакция.

Закрыть крышку инкубатора. Нажать кнопку «Старт». Действия пп. 3 и 4 тоже следует выполнять максимально оперативно.

По истечении 5 минут (этот период называется первая инкубация, отсчет ведется с помощью вмонтированного в Heatsensor таймера), раздаются звуковой и световой сигналы. Выключить установку.

Поместить в микролунку тест-полоску.

Снова нажать «Старт». Продолжить нагрев в течение еще 5 минут (вторая инкубация).

После окончания, выключить прибор, вынуть тест-полоску и положить ее на лист бумаги. Прочитать результат. Это надо сделать в течение 5 минут после окончания анализа, не позже (не зависимо от того, визуально или с помощью Readsensor). Если итоги положительные, их надо подтвердить дополнительным исследованием.

Визуальное считывание результатов работы форсенсораВизуальное считывание результатов

Начинать расшифровку необходимо с проверки наличия контрольной линии вверху полоски. Если ее нет, анализ следует считать недействительным. Если есть, тогда проверяют тестовые линии – по очереди, сверху вниз: тетрациклин, левомицетин, стрептомицин, бета-лактамы. Проверка заключается в сравнении интенсивности цветовой окраски двух линий – контрольной и тестовой, соответствующей определенному антибиотику .

Если цвет тестовой линии более интенсивный, чем контрольной, это значит, что результат – отрицательный.

Данный антибиотик в пробе молока отсутствует, либо содержится на более низком уровне, чем приведен в справочной таблице.

Если же тестовая светлее, чем контрольная, равная ей или вовсе отсутствует, то – положительный. Количество этого препарата соответствует нормативному или больше данного значения.

Таким способом надо проверить состояние всех тестовых полос. Если по какой-то из них невозможно понять, светлее она или такая же, как контрольная, значит, результат по ней считается положительным и требует повторного исследования.

Принцип действия форсенсора

В основу технологии положена комплексообразующая реакция антибиотиков четырех указанных выше групп с меченными коллоидным золотом белковыми рецепторами. После проведения анализа, проводится визуальное, или с помощью специального аппарата, определение наличия рецепторов, которые остались свободными.

Чем больше их осталось свободными, тем, значит, меньше частиц антибиотиков вступили с ними в реакцию, тем ниже содержание медикамента в молоке и, как следствие, тем более интенсивным получается цвет соответствующей тестовой линии. Если же медпрепарата «много», то его частицы связывают все или почти все рецепторы. Так как свободных рецепторов остается «мало» или нет вовсе, то тестовая линия окрашивается ими слабо или совсем не видна.

После того, как молоко нальют в микролунку в термостате и включат прибор на первую инкубацию, находящийся в пробирке реагент суспензируется с пробой. Моноклональные антитела (рецепторы) связываются с веществами, которые проверяются на наличие в молоке (то есть, с антибиотиками).

Через 5 минут нагрева аппарат выключается, и в лунку помещают тест-полоску. Проверяемая жидкость начинает подниматься по полоске, проходя через расположенные на ней зоны поглощения.

Если искомых антибиотиков в молоке в достаточном количестве нет, то в этих зонах должны появиться цветные линии.

Если есть, то линии окажутся бледными или не появятся совсем, в зависимости от концентрации соответствующего медпрепарата.

Его основным узлом является металлический нагреватель, расположенный в пластиковом корпусе. Тепловой блок работает по методу электромагнитной индукции. Поддерживает оптимальную для анализа температуру 40 град С, с точностью до плюс-минус 3 град С. По истечению срока инкубации, включается световой и звуковой сигналы. Полоски выбрасываются автоматически. Данные выводятся на дисплей.

В продаже имеется HeatSensor OCTO APP052, предназначенный для одновременной работы с 8-ю пробами . А также HeatSensor AERNE 230V APP004 – на 24 пробы .

У прибора есть несколько опций, которые выбираются, в зависимости от среды и условий анализа. Предусмотрено 2 рабочих режима: длительный и быстрый (последний запрограммирован по умолчанию). В первом случае надо ввести все показания оператора и реагентов. Во втором – только номер пробы.

Справа на приборе есть выдвижная ячейка с отверстием (прорезью) в центре. В нее вставляется тест-полоска. Чтобы молоко с индикатора не попало в оптическую часть аппарата, пропитанный жидкостью фильтр надо удалить.

Результаты появляются на дисплее через 10 секунд после установки полоски в ячейку и включения устройства в режим считывания.

Регулярное и повсеместное использование экспресс-тестов, как и других технологий определения антибиотиков в молоке, является надежным барьером для проникновения медпрепаратов в организм человека через продукты питания. В конечном итоге, это важный элемент здорового образа жизни населения страны.

Источник: http://longtrade.by/news/metodi-opredeleniya-nalichiya-antibiotikov-v-moloke.html

Антибиотик
Добавить комментарий